قبل استخدام أنبوب الطرد المركزي المخروطي ، يجب عليك التأكد من أن الأنبوب يمكنه تحمل الضغط المطلوب أثناء الطرد المركزي. لمنع الخلطات ، من المهم تحديد مستوى التعبئة وتجنب إزاحة الغطاء أثناء الاستخدام.
لتطبيقات ثقافة الخلايا ، يتم استخدام أنابيب الطرد المركزي المخروطي المعقمة. يحتوي هذا النوع من الأنبوب على عملية تصنيع عالية القوة ومصممة لتوفير استقرار أكبر في درجة الحرارة. لإعداد أنبوب الطرد المركزي المخروطي ، اتبع الخطوات الموضحة أدناه.
أضف الحجم الصحيح لوسائط التدرج الكثافة إلى كل أنبوب الطرد المركزي المخروطي المعقم. تتوفر وسائط التدرج الكثافة في مجموعة متنوعة من الوسائط بما في ذلك محلول الملح المتوازن لـ Hanks (HBSS) و PBS. كلاهما حلول ملحي ولا يحتوي على الكالسيوم أو المغنيسيوم. ومع ذلك ، فإن HBSS مناسب لأنه أقل حمضية من PBS.
بعد ذلك ، قم بتخفيف الدم ووسط الفصل الأولي مع WDR. بعد التخفيف ، نقل العينة إلى أنبوب الطرد المركزي المخروطي المعقم. إذا لم يتم تخفيف الدم ، فسيظهر البلازما أسفل طبقة التدرج الكثافة وقد يكون من الصعب فصله. بدلاً من ذلك ، إذا تم تخفيف البلازما بأكملها ، فيمكن فصل PBMCs عن البلازما.
أخيرًا ، قم بتجميع معاطف Buffy وعصابات Phage في أنبوب الطرد المركزي المخروطي 50 مل. قم بتسمية الأنبوب مع PTID والأحرف الأولى من الفني. بمجرد إعادة عرض العينة ، قم بإزالة نطاقات PHAGE وتجاهل طاف.
للحفاظ على سلامة العينة ، يوصى باتباع بروتوكول للكواشف ، مثل طريقة الطبقة السفلية. تعتمد هذه الطريقة على قوة الجاذبية بين الطبقتين وتخلق المجاميع. طرق أخرى ، مثل التراكب اليدوي ، متاحة أيضًا.
لتقليل إمكانية الخلط ، يوصى بتقليص أنبوب الدم الأولي أعلى وسائط التدرج الكثافة. يجب أن يكون حل الدم والوسائط التدرج الكثافة ماصة ببطء ورفق.
إذا كان أنبوب الطرد المركزي المخروطي غير قادر على التعامل مع ضغط العينة ، فيمكنك استخدام أنبوب إعادة الوسط. تأكد من أن أنبوب إعادة الوسط معقم ويمكن أن يقاوم الضغط. إنه للحفاظ على أنبوب إعادة الوسط في درجة حرارة الغرفة بين الاستخدامات. بدلاً من ذلك ، يمكن تخزين أنبوب إعادة الوسط عند درجة حرارة منخفضة. خلال دورة ذوبان الجليد ، يجب أن يكون إعادة Centrifuge في 2 إلى 8DEGC.
عندما يتم تخفيف الدم ، يمكنك إضافة WDR إليه لزيادة حجمه. يمكنك أيضًا قسوة التخفيف في أنابيب الطرد المركزي المخروطي المعقمة. أضف 0.1 مل من WDR لكل 10 مل من الدم.
بالإضافة إلى ذلك ، يجب ملاحظة PTID على جميع أنابيب الدم المستلمة. سيساعد استخدام معرف PTID على تقليل أي تلوث متقاطع. أيضًا ، يمكنك وضع علامة على كل PTID مع علامات ألوان مختلفة لتجنب الالتباس.
أنبوب الطرد المركزي رقم المتغير | نموذج | RCF | تعقيم | قاع | مواصفات الحزمة |
3030001 | 15 مل | 12000xg | نعم | القاع المخروط | 50/حقيبة ، 10 أكواب/حالة |
3030002 | 15 مل | 12000xg | نعم | القاع المخروط | 50/رف الرغوة ، 10racks/case |
3031001 | 50 مل | 12000xg | نعم | القاع المخروط | 25/حقيبة ، 20BAGS/CASE |
3031002 | 50 مل | 12000xg | نعم | القاع المخروط | 25/رف الرغوة ، 20Racks/case |